當(dāng)前位置：elisa檢測原理及其方法：
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為～0μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.ml。37℃孵育0.5～小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則40nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍，即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至～0μg／ml，每孔加0.ml，4℃過夜。
2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鐘。
4. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則40nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍，即為陽性。
