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小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)

小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)

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小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū) 詳細(xì)資料

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細(xì)胞名稱 小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 上皮樣

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 GT-為GT細(xì)胞系的亞克隆,GT來(lái)源于穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原的轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生的可以分泌促性腺釋放LHRH的腫瘤。GT-細(xì)胞可以表達(dá)pro-LHRH mRNA,并向培養(yǎng)基中分泌LHRH樣的免疫反應(yīng)性的物質(zhì)。

培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-2 4.5g/Liter Glucose) 5%FBS+5%HS

傳代方法 :3傳代;5~7天次。

傳代情況 P20

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)

STR -

同工酶

染色體

主要功能:
()小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達(dá)鈣通道及ICAM-和VCAM-,參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
(3)與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
 生理變化:
()主動(dòng)脈硬化。
(2)主動(dòng)脈瘤
(3)主動(dòng)脈鈣化。
基本特性:
()小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)組織來(lái)源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。
(2)鑒定:肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3)原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù):>5×05 cells/ml。
(5)肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗(yàn)證。
(6)不含有HIV-、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

運(yùn)輸和保存:
小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
)mL凍存細(xì)胞懸液裝于.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存?zhèn)€月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
具體操作:
.預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
2.用75%酒精擦拭經(jīng)過(guò)紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。
3.正確擺放使用的器械:保證足夠的*作空間,不僅便于*作而且可減少污染。
4.點(diǎn)燃酒精燈:注意火焰不能太小。
5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶,放入微波爐內(nèi)高火,8分鐘再次消毒。
6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液:大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。
7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞:注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面,再在鏡下觀察細(xì)胞。
8.打開(kāi)瓶口:將各瓶口一一打開(kāi),同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。?

蝙蝠葛蘇林堿 CAS 70553-76-3 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 0mg

五指毛桃 CAS  訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: g

0-姜酚 CAS 2353-5-7 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: HPLC≥98%;20mg

環(huán)維黃楊星D CAS  訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 20mg

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續(xù)斷(川續(xù)斷) CAS  訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 3g

膠乳粒子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(20μm) CAS  訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 0mL

甘草次酸;8 β-Glycyrrhet CAS 47-53-4 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 20mg

天素;Gastrodin CAS 62499-27-8 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 20mg

;Theobromine CAS 83-67-0 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 50mg

奇任醇 CAS 52659-56-0 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial

槲皮素;Quercetin CAS 7-39-5 訂購(gòu)|咨詢  規(guī)格: 00mg

小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)Rabbit Anti-chicken IgG/Bio  標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.mlc-Myb  轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體 規(guī)格: 0.2ml

Cip4  細(xì)胞分化周期CDC42相互作用蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

HSD7B3  羥類固醇脫酶7β3抗體 規(guī)格: 0.2ml

CPSA(C2F9)  復(fù)合前列特異性抗原單克隆抗體 規(guī)格: 0.2ml

OPCML  片樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.ml

Bax  Bax抗體 規(guī)格: 0.ml

GPV/Goose parvovirus  鵝細(xì)小病毒GPV抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-Mouse IgM  羊抗小鼠IgM 規(guī)格: mg

ADM (ProAM-N20)  上髓質(zhì)素抗體(N端20肽) 規(guī)格: 0.ml

SCEL  SCEL蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-RelB(Ser552)  磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 規(guī)格: 0.ml

操作流程:
小鼠垂體瘤細(xì)胞;GT-說(shuō)明書(shū)主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-43),co2孵箱(日本yamato it-6)。
.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
.2. 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~0倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以×05/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%消化~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用0×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×04。
.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,以0.25%消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于2個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×00%,計(jì)算貼壁率。 
.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液,以×04/孔接種于24孔板,每孔加入ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)0d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

 

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